Aplicación de un método de extracción de ADN a partir de sangre canina sensible y de bajo costo para el diagnóstico molecular de Leishmania sp.

Abstract

La leishmaniosis canina (LC) es una enfermedad causada por hemoparásitos del género Leishmania. Los parásitos se transmiten a través de vectores flebótomos a los seres humanos y a otros mamíferos, generando cuadros tegumentarios y viscerales. Varios estudios han demostrado la eficacia de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para el diagnóstico molecular de LC. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un método de extracción de ADN de Leishmania sp. para su aplicación en el diagnóstico molecular de LC en muestras de sangre canina. Para ello, se comparó la eficiencia de la resina Chelex 100 con la de un kit comercial y con el método tradicional de fenol-cloroformo, para extraer ADN de una muestra de sangre de un perro infectado con L. infantum. En el caso de Chelex 100, se evaluaron diferentes protocolos y se eligió el más conveniente. Para analizar los resultados, se amplificó por PCR un segmento de nucleótidos específico para Leishmania sp. en diluciones seriadas del ADN obtenido, y se registró la máxima dilución para la que se obtuvo una banda de amplificación. Los tres métodos mostraron una sensibilidad similar, hallándose detección hasta una dilución de 3 x 10-4 de la muestra original. Cuando la muestra de ADN extraída por Chelex 100 fue congelada a -20 oC durante 30 y 60 días, se observó que no hubo diferencias en la sensibilidad de la detección luego de estos periodos de almacenamiento. Comparado con el kit comercial, el método de Chelex 100 es 10 veces más económico y el doble de rápido. Estos resultados nos permiten concluir que el método de Chelex 100 constituye una herramienta rápida, sencilla, sensible y económica para la extracción de ADN de Leishmania sp. Es importante destacar que la obtención de muestras de sangre para la detección de LC constituye una técnica menos invasiva que el muestreo de médula ósea utilizado rutinariamente para este fin. En conclusión, al facilitar significativamente el diagnóstico de LC, nuestro trabajo tiene el potencial de mejorar la vigilancia epidemiológica y el manejo de esta enfermedad.